注意事项：

1、注意无菌操作  MVE液氮罐

2、细胞复苏时融化冻存细胞速度要快，防止细胞损伤，细胞复苏后的操作最好在适宜温度中进行，减少冷冻保护剂对细胞的毒性。

3、为了避免复苏过程中细胞液中有冰晶的出现，破坏细胞膜及细胞内部结构。从液氮拿出来，要快速丢入37度水浴，等细胞液刚刚化完取出，加培养液稀释。

4、细胞放入水浴中注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动，使其受热均匀，并防止水浴时水进入细胞冻存管污染细胞。打开细胞冻存管之前要用酒精棉球将冻存管消毒并晾干。

5、液氮一定的危险性，打开液氮罐取出细胞时，要注意防冻，戴防冻手套，防护眼睛。

6、如果冻存管密封不严，液氮可被吸入。由于解冻时冻存管中的气温急剧上升，将可能发生爆炸。复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖。

细胞复苏后贴壁细胞较少的原因：

1、冻存细胞时消化时间过长，导致细胞复苏时失去铁壁能力。

2、细胞冻存液的质量不好也会导致细胞死亡。

3、冻存液的量加的太多也不好。

4、冻存的时候把DMSO混均匀，会有一些影响，但不会太大。MVE液氮罐